沃特世HPLC液相色譜是一種以液體做流動(dòng)相的用于物質(zhì)分離和檢測(cè)的常用儀器。主要由進(jìn)樣系統(tǒng)、輸液系統(tǒng)、分離系統(tǒng)、檢測(cè)系統(tǒng)和數(shù)據(jù)處理系統(tǒng)等組成。在工作時(shí)，HPLC依靠泵加壓樣品，令其通過(guò)填充有吸附劑的壓力柱，依據(jù)溶質(zhì)在不用溶劑中的溶解度不同而對(duì)物質(zhì)進(jìn)行分離的，檢測(cè)器在定性物質(zhì)的同時(shí)，可定量測(cè)定各個(gè)成分的比例。
1.始終保持儀器包括內(nèi)在系統(tǒng)的清潔。
2.室內(nèi)溫度始終保持恒定，因?yàn)槭覝氐淖兓瘜?duì)高效液相色譜檢測(cè)器有影響。
3.所有溶液、試劑、樣品、標(biāo)準(zhǔn)溶液、注射劑等都應(yīng)事先準(zhǔn)備好。
4.提前準(zhǔn)備好備用電源防止停電。
沃特世HPLC液相色譜操作流程：
1．將已經(jīng)過(guò)濾并脫氣的流動(dòng)相注入儲(chǔ)液罐；
2.用流動(dòng)相沖洗金屬過(guò)濾器，然后將過(guò)濾器浸入儲(chǔ)液罐的流動(dòng)相中；
3.將儲(chǔ)液罐放置在一定的高度，以避免由于搬運(yùn)和其他操作人員的移動(dòng)而造成不必要的跌落。
4.然后按以下順序依次啟動(dòng)高效液相色譜儀：泵→檢測(cè)器→高效液相色譜軟件→按預(yù)先計(jì)劃的方法設(shè)置軟件參數(shù)，如分析時(shí)間、檢測(cè)波長(zhǎng)、流速等。
5.啟動(dòng)泵，運(yùn)行5分鐘，主要是為了排除系統(tǒng)中的氣泡，結(jié)束后關(guān)閉所有排氣閥；
6.然后按照預(yù)先計(jì)劃的速度，以固定的速率，如1mL/min左右，運(yùn)行流動(dòng)相，走基線(xiàn)，直到基線(xiàn)平穩(wěn)，就可以在計(jì)算機(jī)軟件上進(jìn)行監(jiān)視；
7.基線(xiàn)平穩(wěn)后，在軟件中設(shè)置樣品的運(yùn)行參數(shù)，如流速和分析時(shí)間等。分析時(shí)間會(huì)因樣品、流速、柱長(zhǎng)等因素變化。
8.參數(shù)設(shè)置完畢后，將固定體積的樣品溶液注入進(jìn)樣閥，然后在軟件中啟動(dòng)注入命令，進(jìn)樣器中的樣品溶液就隨流動(dòng)相進(jìn)入色譜柱；
9.通過(guò)軟件監(jiān)視各項(xiàng)讀數(shù)，當(dāng)檢測(cè)器檢測(cè)到樣品所有峰值，停止運(yùn)行并設(shè)置新的進(jìn)樣。在下一個(gè)樣品分析前，建議留出5-10分鐘，待流動(dòng)相通過(guò)色譜柱，以便清洗之前樣品的殘留物；確認(rèn)基線(xiàn)穩(wěn)定后，進(jìn)行下一次注射。
10.分析結(jié)束后，先關(guān)閉檢測(cè)器，然后關(guān)閉泵，后關(guān)閉軟件。
沃特世HPLC液相色譜廣泛應(yīng)用在有機(jī)化工、生物醫(yī)學(xué)、食品科學(xué)、環(huán)境監(jiān)測(cè)等領(lǐng)域。
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